Dot blot法鑒定分泌型蛋白表達

實驗原理：

Dot blot是一種半定量的蛋白質或核酸檢測方法，其原理是將待測物直接滴于固相載體上，然后通過特異性抗體或探針與待測物結合，最終通過可視化方法來檢測目標分子的存在與否。

溶液配置：

操作步驟：

（1）減取適當大小的PVDF膜，于甲醇活化1分鐘；

（2）將活化后的PVDF膜于ddH2O中，在脫色搖床上清洗15分鐘；

（3）提取預冷離心機，將樣品在4℃低溫條件下8000 rpm離心15分鐘，取上清作為樣品（分泌型蛋白）。

（4）取出活化后的PVDF膜在室溫晾至半干，看見水膜消失即可。將收集的上清、空白對照、陽性對照分別取5ul點樣至PVDF膜上，風干。室溫待樣品吸收，樣品吸收后點樣處顏色加深。

（5）封閉：待PVDF膜上樣品干燥后，于含5%脫脂奶粉的TBST溶液中封閉，37℃培養箱孵育2h或者4℃過夜孵育。

（6）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（7）一抗孵育：用含5%脫脂奶粉的TBST溶液以1：10000的稀釋比稀釋一抗，37℃培養箱孵育2h或4℃過夜孵育。

（8）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（9）二抗孵育：用含5%脫脂奶粉的TBST溶液以1：10000的稀釋比稀釋二抗，37℃培養箱孵育1.5 h。

（10）TBST清洗PVDF膜5次，每次5分鐘。

（11）曝光：用濾紙吸干PVDF膜上的TBST溶液，滴加ECL超敏顯色劑（A液：B液=1：1），提前將化學曝光儀預冷，進行曝光，觀察并記錄結果。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務。